本发明属于植物生物技术领域,具体涉及一种水稻千粒重基因tgw6突变体及其制备方法与应用。本发明通过设计特定的TGW6位点,利用CRISPR/Cas9技术定点编辑了调控水稻千粒重的TGW6基因,获得了一套具有重要应用价值的水稻tgw6缺失突变体新种质,分别为Cas-tgw6-a、Cas-tgw6b或Cas-tgw6c,该类突变体显著影响水稻的千粒重,提高水稻千粒重5%以上。可以用于水稻的高产、稳产育种。